PURIFICACIÓN DE CATEPSINA L DE 28 KDA DE FASCIOLA HEPATICA
DOI:
https://doi.org/10.24039/rtb20151321554Palabras clave:
catepsina L, cromatografía, electroforesis, Fasciola hepatica, proteinasaResumen
El presente trabajo tuvo como objetivo aislar la proteinasa de 28KDa a partir del parásito Fasciola hepatica (Linnaeus, 1758). Esta cisteinil proteasa fue purificada por protocolos clásicos tales como la precipitación con sulfato de amonio, cromatografía de exclusión molecular G-25, G-75, cromatografía de afinidad tiol sefarosa 4B y electroforesis SDS-PAGE al 12 %, siendo monitoreada la actividad enzimática en cada etapa de la purificación. La cisteinil proteinasa se observó como una banda homogénea y pura en el gel SDS-PAGE, la cual tiene una recuperación de 12,7%, 337,500 umol min-1 mg-1 de actividad específica y un número de 260 veces de purificación de la enzima respecto del extracto crudo. Mediante este esquema se purificó la catepsina L de 28 KDA a partir del regurgitado de una manera efectiva comparado con otras alternativas. La cantidad de proteína obtenida fue de 0,032 mg·mL-¹. La enzima migró como una banda homogénea durante la electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS-PAGE al 12,5%, y el peso molecular determinado fue de aproximadamente 28 Kda de acuerdo a su movilidad relativa.
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