The Biologist
(Lima)
VOL. 18, Nº 1, JAN-JUN 2020
The Biologist (Lima)
Versión en Linea:
ISSN 1994-9073
Versión Impresa:
ISSN 1816-0719 Versión CD-ROM:
ISSN 1994-9081
PUBLICADO POR:AUSPICIADO POR:
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA,
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMÁTICA,
UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL
The Biologist
(Lima)
The Biologist (Lima), 2020, 18(1), jan-jun: 119-134.
ORIGINAL ARTICLE / ARTÍCULO ORIGINAL
STANDARDIZATION OF A PROTOCOL TO EVALUATE MICROPLASTICS IN MARINE BIVALVES IN
THE DEPARTMENT OF LIMA, PERU
ESTANDARIZACIÓN DE UN PROTOCOLO PARA EVALUAR MICROPLÁSTICOS EN BIVALVOS
MARINOS EN EL DEPARTAMENTO DE LIMA, PERÚ
1 Grupo de Investigación en Sostenibilidad Ambiental (GISA), (EUPG), Laboratorio de Ecología y Biodiversidad Animal
(LEBA). Facultad de Ciencias Naturales y Matemática (FCCNM). Universidad Nacional Federico Villarreal (UNFV), Lima,
Perú.
2 Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Ricardo Palma. Santiago de Surco, Lima, Perú.
Correo electrónico: joseiannaconeoliver@gmail.com
*Corresponding Author: joseiannaconeoliver@gmail.com
ABSTRACT
Keywords: Aulacomya atra – Choromytilus chorus – microplastics – mollusks
The Biologist (Lima)
ISSN Versión Impresa 1816-0719
ISSN Versión en linea 1994-9073 ISSN Versión CD ROM 1994-9081
119
doi: 10.24039/rtb2020181478
1 1 1 1, 2,*
Fernando Valencia-Velasco ; Angélica Guabloche-Zuñiga ; Lorena Alvariño & José Iannacone
The amount of microplastics (MP) that are thrown into the sea is increasing considerably, which affect
marine animals, and especially invertebrates. MPs pose a threat to food safety. A protocol was developed
to evaluate MP in the marine bivalves Choromytilus chorus (Molina, 1782) and Aulacomya atra (Molina,
1782) in the department of Lima, Peru. The bivalves were obtained from the Ancón Fishing Terminal,
Lima, Peru. In the first stage of protocol development, C. chorus was used, determining which was the
most effective procedure in the digestion of organic matter with hydrogen peroxide (H O ), and in the
2 2
flotation and filtration of the MP. During H O digestion the most suitable container was a 1L clear glass
2 2
bottle with 2 cm opening and 25 cm height. The volume of H O at 30% allowed the best digestion of
2 2
organic matter (OM) at 99% in C. chorus was 18 g of OM in 200 mL of H O . The water bath was more
2 2
effective than the magnetic oscillator, since it allowed evaluating a greater number of samples, with
oscillation and constant temperature up to 48 h of digestion. During MP flotation and filtration, a 1L bottle
was filled with saturated saline, then a 10 mL glass volumetric pipette was used to extract the supernatant,
and the contents were finally emptied into a glass Petri dish, showing to be the best method for the
extraction of MP. In the second stage, the MP for both bivalve species was characterized, obtaining two
types: fibers that are the most abundant, with red, blue and white color, and yellow and white pellets. The
-1 -1
concentrations of MP were 1.91 ± 0.11 items·g and 1.64 ± 0.08 items·g for C. chorus and A. atra,
respectively. The protocol was optimal for laboratory conditions, obtaining a good observation and
classification of the MP, which will allow other researchers to use this protocol, taking into account that
there are no studies yet on these two invertebrates in Peru.
En 1907, el ganador del Premio Nobel en Química,
el belga Leo Hendrick Baekeland (1863-1944)
creó la primera sustancia de plástico sintética, la
baquelita. No fue hasta medio siglo después, en los
años cincuenta, que éstas fibras sintéticas
comenzaron a producirse masivamente (Derraik,
2002).
La producción mundial de plásticos creció casi un
3,16% en el 2018 respecto al 2017 alcanzando los
359 mill de t métricas (NG, 2020), si la tendencia
de producción y consumo continúa, se estima que
se alcanzará los 1.000 mill de t para el 2050
(GESAMP, 2019). Siendo mayormente atribuidos
a seis tipos diferentes de plásticos: polietileno (PE),
polipropileno (PP), cloruro de polivinilo (PVC),
poliuretano (PP), polestireno (PS) y tereftalato de
poetileno (PET) (Miller et al., 2017).
La persistencia de los plásticos en la naturaleza
puede conducir a riesgos para la salud pública en el
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
RESUMEN
Palabras clave: Aulacomya atra – Choromytilus chorus – microplásticos – moluscos
La cantidad de microplásticos (MP) que son arrojados en el mar va aumentando considerablemente, los
que afectan a los animales marinos, y sobre todo a los invertebrados. Los MP representan una amenaza
para la inocuidad alimentaria. Se estandarizó un protocolo para evaluar MP en los bivalvos marinos
Choromytilus chorus (Molina, 1782) y Aulacomya atra (Molina, 1782) en el departamento de Lima, Perú.
Los bivalvos fueron obtenidos del Terminal Pesquero de Ancón, Lima, Perú. En la primera etapa de la
estandarización se usó a C. chorus, determinando cuál fue el procedimiento más eficaz en la digestión de
la materia orgánica con peróxido de hidrogeno (H O ), y en la flotación y filtración de los MP. Durante la
2 2
digestión con H O el envase más adecuado fue la botella de vidrio transparente de 1 L con 2 cm de
2 2
abertura y 25 cm de altura. El volumen de H O al 30% que permitió la mejor digestión de la materia
2 2
orgánica (MO) al 99% en C. chorus fue 18 g de MO en 200 mL de H O . El baño maría fue más eficaz que
2 2
el oscilador magnético, púes permitió evaluar un mayor número de muestras, con oscilación y
temperatura constante hasta las 48 h de digestión. Durante la flotación y filtración de MP, se llenó hasta
los ¾ una botella de un L con solución salina saturada, luego se empleó una pipeta volumétrica de vidrio de
10 mL para extraer el sobrenadante y finalmente se vació el contenido en una placa Petri de vidrio,
mostrando ser el mejor método para la extracción de MP. En la segunda etapa, se caracterizaron los MP
para ambas especies de bivalvos obteniéndose dos tipos: fibras que son las más abundantes, con color rojo,
azul y blanco, y pellets de color amarillo y blanco. Las concentraciones de MP fueron de 1,91±0,11
-1 -1
ítems·g y 1,64±0,08 ítems·g para C. chorus y A. atra, respectivamente. La estandarización de este
protocolo resultó óptima para las condiciones del laboratorio, obteniendo una buena observación y
clasificación de los MP, lo que permitirá que otros investigadores puedan utilizar este protocolo, tomando
en cuenta que aún no hay estudios en estos dos invertebrados en el Perú.
INTRODUCCIÓN
120
ser humano y para la fauna silvestre, produciendo
cambios en los ecosistemas, exponiendo sustancias
químicas que están presentes en la composición de
éstos o que han sido adsorbidos por el medio
acuático (Ashton et al., 2010; Engler, 2012;
Rochman et al., 2014; Woodall, 2014; Wang et al.,
2016; Miller et al., 2017; Granek et al., 2020).
La Organización de las Naciones Unidas (ONU) en
el 2016 determinó que 800 especies acuáticas
fueron contaminadas por MP, siendo 69% mayor
que lo registrado en 1977 (GESAMP, 2019). En el
Perú, el 2018 se estableció la ley que regula el
plástico de un solo uso, y los recipientes o envases
plásticos descartables (El Peruano, 2018), con la
que se espera una reducción de la contaminación
plástica y microplástica (MP), a pesar que se dio un
periodo de cumplimiento.
Los MP a menudo se encuentran en el tracto
digestivo de los organismos acuáticos como
bivalvos y peces pequeños que se consumen
enteros, y que tienen más probabilidades de
exponer los MP en la dieta humana, por lo que
Valencia-Velasco et al.
121
representan una amenaza a la inocuidad
alimentaria (Salim et al., 2013; Galloway, 2015;
GESAMP, 2019; Jabeen et al., 2017).
Los MP también están en el aire, pero es más difícil
la contaminación por esta vía, debido a que se
cuenta con los vellos nasales que no permiten el
ingreso directo de los MP (Smith et al., 2018). Aún
no hay estimaciones sobre la cantidad de MP que
pueda generar un problema grave de salud al
hombre, al ser expulsados por las heces o exista una
translocación a cualquier sistema como
circulatorio o respiratorio (Prata et al., 2019).
Las investigaciones en los bivalvos demostrarían
que estos moluscos marinos están siendo
contaminados por MP, debido a que son filtradores
que absorben todo lo que está en su entorno y
forman parte de la cadena trófica que afectan a
muchos vertebrados y aves marinas (Mathalon &
Hill, 2014; Van Cauwenberghe & Janssen, 2014;
Paul-Pont et al., 2016; Purca & Henostroza, 2017;
Fang et al., 2019). Los bivalvos son conocidos
como buenos bioindicadores de contaminación de
MP (Von Moos et al., 2012; De Witte et al., 2014;
Avio et al., 2015; Purca & Henostroza, 2017). Se ha
demostrado que los MP, se adhieren al cuerpo, a las
gónadas, a las branquias, etc. de los bivalvos
(Kolandhasamy et al., 2018).
En el Perú, se tiene un estudio con MP en el bivalvo
Argopecten purpuratus (Lamarck, 1819)
colectados en los mercados pesqueros de Lima,
Perú (De_la_Torre et al., 2019a). Escasas
investigaciones en el Perú, han sido realizadas
principalmente en peces y en la arena de playas
marinas (Purca & Henostroza, 2017; Ory et al.,
2018; De-la-Torre, 2019ab; De-la-Torre et al.,
2019abc; Iannacone et al., 2019; De-la-Torre et al.,
2020).
Un problema que se observa es que los métodos
que describen la separación e identificación de MP
en bivalvos son altamente variables y es necesario
que se estandarizen para hacer comparaciones
adecuadas (Miller et al., 2017; Phuong et al.,
2018ab; Covernton et al., 2019: Thiele et al., 2019;
Von Friesen et al., 2019; Baechler et al., 2020).
Otros países, toman en cuenta las limitaciones que
tienen los laboratorios y la gran variedad de
digestores de materia orgánica (MO) para la
extracción de MP, los cuales muestran diferentes
niveles de eficacia (Van Cauwenberghe & Janssen,
2014; Li et al., 2015; Vandermeersch et al., 2015;
Lusher et al., 2017). Por lo que se deben priorizar el
uso de materiales y equipos que no requirieran de
altos presupuestos, buscando la mayor eficacia de
los insumos utilizados (Miller et al., 2017).
Aulacomya atra (Molina, 1782) “choro” es un
recurso hidrobiológico bentónico costero de aguas
superficiales, cuyo hábitat es el sustrato rocoso de
hasta 70 m de profundidad. Se distribuye
principalmente entre Perú y Chile (Paredes et al.,
2016). La pesquería de este recurso es de alta
importancia comercial, al ser una especie de alto
valor biológico proteico para el consumo humano
(Ríos et al., 2018). El cambio climático y la
sobreexplotación del recurso mediante la pesca
artesanal influyen significativamente en su
sostenibilidad, en relación a su biometría y
abundancia (Solis et al., 2019; Gonzales &
Espinoza, 2020). Por lo que en el Perú, existe un
programa de recuperación de este recurso
hidrobiológico y se ha creado una Comisión
Sectorial de Trabajo Técnico (PRODUCE, 2018b).
Choromytilus chorus (Molina, 1782) “choro
zapato” es una especie de bivalvo de importancia
ecológica y económica pesquera (Avendaño &
Cantillánez, 2011). Se distribuye desde el Callao,
Perú hasta el sureste del Pacífico de Chile (Paredes
et al., 2016; Benítez et al., 2018).
En el Perú, ambas especies de moluscos son
consumidas por el ser humano principalmente en
fresco y durante el 2017 fueron extraídas 2.688 t
(PRODUCE, 2018a).
A la fecha no se tiene en el Perú una
estandarización de un protocolo para evaluar MP
en estas dos especies de bivalvos de importancia
ecológica y económica. El objetivo de la presente
investigación fue estandarizar un protocolo para
evaluar MP en bivalvos marinos en el
departamento de Lima, Perú.
Obtención Material biológico
La obtención del material biológico fue realizada
MATERIALES Y MÉTODOS
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Microplastics in marine bivalves
122
en el puerto de Ancón (77°10'9,55"LO,
11°46'17,36" LS), departamento de Lima, Perú a
43 km al norte del centro de Lima, Perú durante el
verano del 2019. Las dos especies de bivalvos
evaluadas, A. atra y C. chorus presentan
importancia comercial y son de alto consumo por la
población peruana (AFIB-DGIRDL, 2016). Las
muestras fueron transportadas en una caja
enfriadora con hielo a una temperatura de 5°C a 10
°C, para evitar la descomposición de los bivalvos
hasta un máximo de 2 h de transporte. En el
laboratorio se realizó la verificación taxonómica
con la Guía ilustrada para el reconocimiento de las
especies de moluscos bivalvos con valor comercial
(IMARPE, 2016).
Como paso previo a la estandarización se evaluó un
aproximado de 100 individuos de cada una de las
dos especies, a cada una de los cuales se les tomó la
longitud con un pie de rey marca Mitutoyo®. Se
registró el peso con valvas y sin valvas de cada uno
de los individuos en una balanza analítica marca
AND® con una resolución de 0,0001 g. La
determinación de la longitud y del peso de cada
bivalvo fue realizada en el Laboratorio de Ecología
y Biodiversidad Animal (LEBA) de la Facultad de
Ciencias Naturales y Matemática (FCCNM) de la
Universidad Nacional Federico Villarreal
(UNFV), Lima, Perú. Todo el material utilizado fue
lavado con agua filtrada que se obtuvo por medio
de un embudo y un filtro de nitrocelulosa con poro
de 11 um.
Estandarización del protocolo
Se empleó únicamente a C. chorus para determinar
cuál fue el procedimiento más eficaz durante la
digestión de la MO con peróxido de hidrogeno
(H O ), y la flotación y filtración de MP.
2 2
Digestión con peróxido de hidrogeno (H O )
2 2
Se realizó en tres etapas secuenciales que
seleccionaron el procedimiento más eficaz.
Tipo de recipiente: para la digestión de los tejidos
blandos de C. chorus, se evaluó la eficacia de tres
tipos de recipientes en la obtención de MP y una
idónea observación de la eficacia del digestor en:
(1) vaso tipo Beaker, (2) botella comercial
transparente alta y (3) botella color ámbar, todos de
1 L de capacidad. La eficacia fue evaluada
porcentualmente y se emplearon los criterios
señalados por Li et al. (2015) en base al grado de
transparencia y digestión de la MO.
Número de especímenes, grupos de tamaño y
límite de peso: se realizaron tres diferentes
ensayos. El primero que evaluó el efecto del
número de especímenes de C. chorus consistió en
estratificar al azar en 2, 3 y 4 especímenes. Cada
agrupación contó con 3 repeticiones. El segundo,
determinó el efecto del grupos de tamaño del
bivalvo y consistió en formar 3 grupos de acuerdo
al peso de los especímenes sin valvas; el grupo 1
presentó bivalvos de menor peso entre 3 g a 4,5 g, el
grupo 2, los de mediano peso entre 4,6 g a 6 g y el
grupo 3 los más pesados de 6 g a más. Cada grupo
contó, nuevamente con 3 repeticiones. Finalmente,
para el tercer ensayo que evaluó el efecto del límite
del peso, no importó el número, ni peso de los
especímenes individuales, sino que tres grupos
presentaran como máximo 18 g, 20 g o 25 g.
Tipo de equipamiento: se colocó en un baño maría
con oscilación a 65°C, y en paralelo se colocaron
en un oscilador magnético. En ambos equipos se
evaluó el tiempo de digestión a 24 h y 48 h de
exposición (Li et al., 2016). Se analizó la eficiencia
del baño María y del oscilador magnético, como
fuentes de calor en el proceso de digestión. El baño
maría utiliza al agua como fuente de calor y el
oscilador es de contacto directo con el metal (Li et
al., 2015). Se usaron dos diferentes tipos de
volúmenes de 200 mL y 250 mL de H O al 30 % a
2 2
los recipientes de 1 L con los tejidos de C. chorus,
para digerir la MO (Li et al., 2015).
Luego de la selección del mejor protocolo de
digestión con H O se continuó con la etapa de
2 2
flotación y filtración de MP.
Flotación y filtración de Microplástico
Se siguieron tres procesos alternos para evaluar la
flotación y filtración más eficaz.
Primero: a cada frasco con la MO blanda digerida
de los bivalvos se le colocó una concentración de
-1
0,37 g·mL de NaCl filtrado y reposada toda una
noche. Al día siguiente se filtró el sobrenadante con
papel filtro de membrana de celulosa con una
porosidad de 11 um y 120 mm de diámetro, y
seguidamente el filtro se colocó en una placa Petri
de vidrio con cubierta, lavada con agua filtrada.
-1
Segundo: a otro grupo se le agregó 0,37 g·mL de
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Valencia-Velasco et al.
123
NaCl y se dejó reposar toda la noche, esta solución
fue agregada hasta el tope de la botella y fue
cubierta por un portaobjetos o laminilla, el cual se
sacó y se revisó directamente al microscopio
óptico, este proceso fue repetido 3 veces para evitar
la pérdida de MP.
Tercero: Finalmente, a otro grupo se le adicionó
-1
0,37 g·mL de NaCl hasta los ¾ de la botella y con
una pipeta de vidrio se obtuvo 10 mL del
sobrenadante, y se calentó a 40 °C hasta obtener
todo el material completamente seco, y luego se
revisó al estereoscopio.
Luego de la selección del protocolo más eficaz de
la flotación y filtración de MP con C. chorus se
continuó con la cuantificación y caracterización de
MP con ambas especies de bivalvos: A. atra y C.
chorus
Microplástico
Se consideró MP a todo plástico menor a 5 mm
(Barboza et al., 2019). Como parte de esta
estandarización se hizo un conteo de MP en A. atra
-1
y C. chorus en base al número de items·botella ;
-1
número de ítems por individuo (ítems·individuo )
-
y por número de ítems encontrados por g (ítems·g
1), también se clasificaron acorde al color y la forma
por el método de identificación visual (Hidalgo-
Ruz et al., 2012; Rezania et al., 2018). En adición,
se consideró meso-plástico a todo plástico mayor a
5 mm y menor a 20 mm encontrado en el ensayo
(Andrady, 2017; Miller et al., 2017).
Análisis de datos
La prueba de t de Student se usó con el fin de
comparar los ítems de MP para el total MP, para
- 1
fibras, pellets y colores, ítems·g y
-1 -1
ítems·individuo e ítem·botella . Se empleó el
estadístico F de Fisher para la prueba de
homogeneidad de Varianzas de Levene. El
estadístico (K-S) Kolmogorov-Smirnov para
evaluar la normalidad de los datos. En el caso de no
cumplir ninguno de los dos supuestos para las
pruebas paramétricas fue empleada la prueba de U
de Mann-Whitney. Para comparar el número de
-1
ítems·g de MP según color de fibra se usó la
prueba de ANDEVA, y posterior prueba de Tukey.
Para todos los casos se empleó el software
estadístico SPSS versión 25,00. Se usó un valor de
significancia de 0,05 para una adecuada
contrastación de los datos.
Aspectos éticos
Los autores señalan que se cumplieron todas las
normas éticas nacionales o internacionales.
Digestión con peróxido de hidrogeno (H O )
2 2
Tipo de recipiente: el uso de vaso beacker de 1 L
se mostró poco eficaz debido que cuenta con una
abertura de 11,5 cm, la cual es muy grande y podría
ser propensa a una contaminación cruzada, por los
MP que se encuentran en el aire (Smith, 2018).
También, para analizar la diferencia de densidades
no se mostró muy eficaz por su ancho.
La botella de vidrio color ámbar se mostró más
eficaz para la extracción de MP por diferencia de
densidades, aunque no permitió observar bien el
proceso de digestión y son de mejor manejo para el
uso del oscilador magnético en comparación al del
baño maría, por su tamaño de 14 cm y abertura de 3
cm.
La botella de vidrio de color transparente de 2 cm
de abertura y 25 cm de altura demostraron ser las
más adecuadas para el proceso de digestión de MP,
pero al realizar la extracción con una pipeta de
vidrio volumétrica no permitió un buen manejo y el
otro inconveniente fue que al ser muy largos no se
usó adecuadamente en el baño maría que se tenía en
el laboratorio. Se comprobó que las botellas de L y
de color transparente, permitieron observar la
digestión con mejor precisión. Li et al. (2015)
señalan que en otros ensayos utilizan matraces que
ayudaron a evitar que los MP migren a zonas donde
se pueden adherir y así realizar un mal conteo de los
mismos.
Número de especímenes, grupos de tamaño y
límite de peso: Al colocar en la botella de vidrio de
1 L de color transparente comparativamente 2, 3 y 4
especímenes de C. chorus, se observó que cuando
fue realizado con 200 mL de H O se vio un
2 2
incremento en la eficacia de la digestión de la MO
al emplear solo 2 individuos en comparación con 3
y 4 especímenes. Al utilizar 250 mL de H O
2 2
también se vio el mismo patrón de incremento en la
eficacia al emplear un número menor de
individuos (Fig. 1). Al separar por pesos en 3
intervalos con 3 individuos de C. chorus por
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Microplastics in marine bivalves
124
envase, la digestión con el primer grupo de menor
peso para 200 mL y 250 mL de H O fue óptima al
2 2
99 % para ambos volúmenes; en el segundo
intervalo la digestión para 200 mL disminuyó en un
5 % y para 250 mL de 3 % en relación al primer
grupo. Finalmente, para el tercer grupo con los
individuos más grandes la digestión de la MO
disminuyó en un 17 % para 200 mL y para 250 mL
fue una disminución del 15 % en relación al primer
grupo (Fig. 2).
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Ecacia
234
97.5 99 94 97
80
90
200 mL
250 mL
Numero de especimenes
Figura 1. Porcentaje de eficacia en la digestión de la materia orgánica (MO) con H O respecto al número de especímenes por
2 2
frasco de Choromytilus chorus.
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Ecacia
99 94 96
82 84
200 mL
250 mL
99
1 2 3
Grupos por tamaño
Figura 2. Porcentaje de eficacia en la digestión de la materia orgánica (MO) con H O por grupos de tamaño de Choromytilus
2 2
chorus. Grupo de tamaño 1: peso entre 3 g a 4,5 g. Grupo de tamaño 2: peso entre 4,6 g a 6 g. Grupo de tamaño 3: peso de 6 g a más.
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Valencia-Velasco et al.
100
95
90
85
80
75
Ecacia
99
94
86
99
200 mL
250 mL
95
99
Materia orgánica “g”
25 1820
125
Al analizar las botellas que contenían 20 g de MO
con 200 mL de H O , se mostró una digestión de
2 2
95% y al someterla a 250 mL, la digestión fue de un
99%. Para el análisis de las botellas con 25 g de MO
con 200 mL de H O se vio una disminución en la
2 2
digestión del 9% y al someterla a 250 mL la
digestión disminuyó en un 5%. Acorde a estos
resultados se hizo una prueba más en la que se
colocó 18 g de MO con 200 mL y 250 mL de H O
2 2
mostrando una digestión del 99% para ambos
casos. Optimizando así el uso del H O (Fig. 3).
2 2
Tipo de equipamiento: El uso del oscilador
magnético permitió lograr una digestión del 94 %
utilizando 20 g de MO con 200 mL de H O . Se
2 2
comparó con el baño maría a la misma
concentración y la eficacia aumento a 99 % de
digestión. El oscilador magnético empleado en el
laboratorio permite el uso de una sola botella, el
baño maría permite el uso de 12 botellas con
muestras. Se observó que mantener las muestras a
una temperatura de 65 °C sin oscilación no es
suficiente para obtener una buena digestión al 99%,
por lo que el movimiento se hace necesario para
este protocolo. El baño maría fue más eficaz que el
oscilador magnético, púes permite evaluar un
mayor número de muestras, con oscilación y
temperatura constante hasta las 48 h de digestión.
Para obtener una mejor digestión se utilizó 48 h de
exposición a 65 °C en el baño maría como lo
estableció Li et al. (2015) en su protocolo. A las 24
h no se observó una digestión óptima, después de
este proceso se dejó 24 h más a temperatura
ambiente en reposo, y no se vio necesario más
tiempo.
El NaCl utilizado fue una concentración saturada a
60 °C para evitar que el agua se evapore. Li et al.
(2015) emplearon una solución salina saturada. En
cambio, Li et al. (2016) mencionan que utilizaron
una solución salina sobresaturada con una
-1
concentración de 1,2 g·mL de NaCl, lo que para
este experimento resultó muy complicado de
obtener por lo cual se llegó a saturar 800 mL de
agua filtrada con 296 g ± 0,5 g de NaCl, alcanzado
-1
una densidad de 1,1 g·mL . Para Mathalon & Hill
-1
(2014), 250 g·L de NaCl es necesario para generar
diferencia de densidades entre MP y cualquier
artefacto en el envase. Se ha señalado como
ventajas del uso del NaCl para la flotación de los
MP, el que sea una metodología relativamente
barata y simple, de baja peligrosidad, y que es un
método verificado para PS, PA, PP, PVA y PE. Sin
embargo entre las principales desventajas se indica
que sus tasas de recuperación de MP son solo entre
85% y 95%, se requiere múltiples separaciones de
densidad para lograr altas tasas de recuperación, y
finalmente puede emplear mucho tiempo (Miller et
al., 2017).
Figura 3. Porcentaje de eficacia en la digestión de la materia orgánica (MO) en g con H O con límite de peso en Choromytilus
2 2
chorus.
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Microplastics in marine bivalves
126
La cantidad de MO como máximo para 200 mL de
H O al 30 % fue de 5 g (Li et al., 2015). Mathalon
2 2
& Hill (2014) utilizó 150 mL de H 2 O 2 al 30 %
para la digestión de 10 g de MO. En esta
estandarización se comprobó que la digestión de
los bivalvos no se realiza al 100 %, pero si se
muestra alta eficacia con un peso mucho mayor al
de 5 g. Los experimentos mostraron que se puede
usar hasta 18 g de MO si se usa 200 mL de H O ,
2 2
con un protocolo que no separa al azar, ni por
intervalos de tamaño y peso, si no por una
agrupación de bivalvos que no excedan el peso
límite de 18 g. Esta estandarización está apoyado
por la agitación y temperatura constante el cual no
fue modificado del protocolo de Li et al. (2015),
debido a que una temperatura mayor a 65 °C puede
ocasionar la perdida de MP y el no mantener en
oscilación las muestras dificulta la rápida digestión
(Claessens et al., 2013; Miller et al., 2017). Se
realizó estos experimentos utilizando el H O
2 2
minimizando los costos y obteniendo los mejores
resultados.
El tiempo de digestión con H O al 30 % fue de 24 h
2 2
a una temperatura de 65°C con oscilación
constante y después se dejó reposar por 24 h o 48 h
de exposición a temperatura ambiente según el
grado de digestión (Li et al., 2015). Para esta fase se
vio necesario que la digestión sea por 48 h con una
temperatura de 65 °C, oscilación constante a 80
rpm y por 24 h a temperatura ambiente, lo que
corroboró que a mayor cantidad de MO a digerir es
mayor el tiempo de digestión (Mathalon & Hill,
2014). En los experimentos se observó que hay un
límite de MO para un volumen de H O al 30 % que
2 2
se puede digerir a pesar de darle un tiempo más
prolongado, el cual muestra que para 20 g de MO se
hace necesario usar más de 210 mL de H O y si la
2 2
cantidad de MO fuera de 25 g es necesario el uso de
más de 250 mL de H O para la digestión.
2 2
El uso de H O para la digestión de MO blanda
2 2
como la del tejido de los bivalvos tiene una alta
eficacia cuando se quiere obtener MP (Miller et al.,
2017). Algunos ácidos hacen una digestión mucho
más rápida pero con resultados menos eficaces en
la obtención de MP ya que estos ácidos como el
HNO deterioran las fibras MP o las decoloran
3
(Vandermeersch et al., 2015; Miller et al., 2017).
También se ha encontrado en la literatura científica
que el uso de métodos de digestión alcalinos como
el KOH para invertebrados marinos, tiene una alta
eficacia y no genera ningún cambio en los MP que
se desean analizar (Claessens et al., 2013; Thiele et
al., 2019). Miller et al. (2017) señalan que el KOH
tiene como ventajas el emplear una metodología
simple, ser relativamente barato, tiempo de
digestión corto de solo 24 h y ser fácilmente
accesible en el laboratorio. Sin embargo, puede
presentar como desventaja que las tasas de
recuperación registradas son por peso y no por
abundancia, y su aplicabilidad a todo tipo de
muestras no es bien conocida.
Flotación y filtración de microplásticos
Uno de los principales problemas fue lograr la
flotación de los MP y determinar la forma más
adecuada de obtención. Cuando se colocó la
solución saturada de NaCl se observó que se
formaba espuma en el frasco y eso dificultó el
trasvaso por el filtro a otro recipiente. La
generación de espuma no permitió observar con
claridad los MP en el papel filtro. Aparte que este se
saturaba con cristales de sal, por ello este método
fue descartado.
Al probar el método de flotación al tope de la
botella con el uso de una laminilla (Iannacone et
al., 2019), no mostró eficacia, debido a que la
espuma generada por la reacción del agua con NaCl
y con el H O , causaba el derrame del contenido y
2 2
pérdida de MP. La laminilla solo contenía espuma y
muy poco de MP se observó por lo cual se tuvo que
descartar este protocolo (Iannacone et al., 2019).
Llenar hasta los ¾ de botella de un L con solución
salina saturada y luego emplear una pipeta de 10
mL para sacar el sobrenadante con mucho cuidado
y vaciar el contenido en una placa Petri de vidrio
limpia mostró ser el mejor método a utilizar. Para
evitar que los MP se adhieran a la pipeta, con agua
filtrada se limpió y vació el contenido en otra placa
Petri. Esta acción se hizo por 2 veces para evitar
perdida de MP, demostrando así que es la que
proporcionó un mejor resultado.
El método de filtración para este tipo de protocolos
usa mayormente una bomba de vacío, filtros de
nitrocelulosa con una porosidad menor o igual a 5
um y una buena limpieza del lugar del trabajo para
evitar la contaminación cruzada por MP que se
pueden encontrar en aire (Li et al., 2015). En este
estudio no se utilizó una bomba de vacío, pero si
fueron probados los métodos clásicos para la
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Valencia-Velasco et al.
127
Figura 4. Microplásticos encontrados en Aulacomya atra y en Choromytilus chorus en el puerto de Ancón, departamento de
Lima, Perú: A: Fibra color azul, B: Fibra color rojo, C: Fibra color blanco, D: Fibra color azul de tamaño peculiar, E: Pellet color
amarillo, F: Pellet color blanco.
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Microplastics in marine bivalves
búsqueda de MP en arena (Iannacone et al., 2019),
lo cual permitió comparar la eficacia de estos
protocolos. Sin lugar a dudas, el utilizar una pipeta
de 5mL de vidrio resultó ser adecuado para el
presente estudio, fue menos costoso que el uso de
una bomba de vacío. Sin embargo, se sabe que el
uso del método de la pipeta tiene sus limitaciones,
debido a que puede que los MP más pequeños se
adhieran en la pipeta generando un error en el
conteo de estos.
128
Figura 5. Meso-plásticos encontrados en Aulacomya atra y en Choromytilus chorus en el puerto de Ancón, departamento de
Lima, Perú; A: meso-plástico con fibras envueltas; B: Artefacto no identificado envuelto en fibras MP; C: meso-plástico duro; D:
meso-plástico azul con fibras MP.
Microplásticos
Los tipos de MP encontrados se clasificaron en
fibras de color blanco, rojo y azul; y los pellets de
color blanco y amarillo (Tabla 1). Para A. atra y
para C. chorus se obtuvo la siguiente secuencia en
valores porcentuales: fibras> pellets y meso-
plásticos. En relación a los colores de MP para A.
atra se observa el siguiente ordenamiento en
porcentaje: fibra roja > fibra azul > fibra blanco >
pellets amarillo > pellet blanco. Similarmente en C.
chorus se obtuvo el siguiente ordenamiento en
porcentaje: fibra roja > fibra azul > fibra blanco >
pellets amarillo = pellet blanco (Tabla 1, Fig. 4).
Los meso-plástico que se encontraron estaban
enredados en fibras de MP como se muestra en la
Fig. 5. No se logró identificar algunas muestras ya
que no tenían forma, pero se determinó que
contaban como meso-plástico.
-1
En la Tabla 1 nos muestra los valores de ítem·g ,
-1 -1
ítem·individuo e ítems·botella .
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Valencia-Velasco et al.
129
La Tabla 2 nos muestra que no se encontraron
diferencias significativas entre el número de MP
tipo fibras, pellets y según colores entre A. atra y en
C. chorus según la prueba de t de student. En el
único caso que se encontraron diferencias fue para
las fibras azules, presentándose valores mayores de
ítems de MP para A. atra que para C. chorus. De
igual forma al comparar los ítems de MP entre los
tres colores de fibras se observó una mayor
cantidad para el color rojo y azul en comparación
con el blanco (F = 43,20, p<0,001; F = 1,67, p
Levene
=0,19). Nuestros resultados concuerdan con
Rezania et al. (2018), quienes señalan que los
colores dominantes en la biota acuática son el
negro y el azul, y mayormente de fibras y
fragmentos.
Los resultados obtenidos en A. atra y C. chorus
fueron comparados con la literatura académica, Li
et al., (2015) evaluaron a 9 especies de bivalvos en
Asia, y obtuvieron que lo más común eran las fibras
que los pellets. En los especímenes evaluados, se
-1
encontraron de 2,1 a 10,5 ítems.g y 4,1 a 57,2
-1
ítems.individuo de MP En el presente estudio se
obtuvieron cantidades menores de MP para ambas
unidades de medida (tabla 1), lo que evidencia
niveles mucho más bajos de MP en el Perú en
comparación al ambiente marino del continente
Asiático (Jambeck et al., 2015).
Tabla 1. Valores porcentuales de MP y meso-plástico encontrados en Aulacomya atra y Choromytilus chorus
procedentes de Ancón, Lima, Perú.
Especies de
bivalvos
fibras
(%)
pellets
(%)
meso-plásticos
(%)
bra
blanco
(%)
bra
azul
(%)
bra
roja
(%)
pellets
blanco
(%)
pellets
amarillo
(%)
item·
g-1
(%)
item·
individuo-1
(%)
Ítems.
botella-1
(%)
Aulacomya atra
92,68
6,05
1,27
14,84
36,77
42,26
2,90
3,23
1,91±0,11
11,48±0,64
34,44±1,91
Choromytilus
chorus 90,48
7,48
2,04
16,92
33,46
41,35
4,14
4,14
1,64±0,08
9,85±0,45
29,55±1,36
Tabla 2. Pruebas estadísticas de comparación entre cantidades de MP en Aulacomya atra y en Choromytilus chorus
en el puerto de Ancón, departamento de Lima, Perú. t = Prueba de t de Student. F = Estadístico de Fisher para la
prueba de homogeneidad de Varianzas de Levene. K-S = Kolmogorov-Smirnov para la normalidad. * = fue
empleada la prueba de U de Mann-Whitney al no cumplir los datos la prueba de Kolmogorov-Smirnov de
Normalidad. P = significancia.
MP
t
p F p K-S p
fibras
1,2
0,25 2,27 0,15 0,70 0,69
pellets
1,06
0,31 1,56 0,23 0,70 0,69
meso-plásticos
0,76
0,46 0,81 0,38 0,26 1,00
fibras blancas
0,11
0,91 1,19 0,29 0,26 1,00
fibras azules
18,0*
0,04 4,05 0,06 1,41 0,04
fibras rojas
1,61
0,13 0,02 0,89 0,94 0,34
pellets blancos
0,80
0,43 2,35 0,15 0,47 0,98
pellets
amarillos
0,6
0,55 1,55 0,23 0,70 0,69
item·g-1
2,06
0,06 2,36 0,14 0,94 0,34
item·individuo-1
2,08
0,05 2,54 0,13 0,94 0,34
Ítems·botella-1 2,08 0,05 2,52 0,13 0,65 0,79
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Microplastics in marine bivalves
Kolandhasamy et al. (2018) encontró en el tracto
intestinal de especímenes de cultivo del bivalvo
-1
Mytilus edulis Linnaeus, 1798, 9,2 ítems·g de MP.
Esta investigación evidencia que los MP no solo
ingresan por filtración, sino también por ingestión.
Li et al. (2018) mostraron que en el molusco M.
edulis de consumo humano directo en los
supermercados del Reino Unido variaron entre 0,7
-1 -1
a 2,9 ítems·g y 1,1 a 6,4 ítems·individuo ,
mostrando que la contaminación MP es alta en
comparación a las especies evaluadas en la
presente investigación.
En otro estudio con M. edulis y Crassostrea gigas
Thunberg, 1793 (Ostreidae) colectadas de
Alemania y Francia de granjas especializadas en su
cultivo para el consumo humano se encontró 0,36
-1 -1
ítems·g y 0,47 ítems·g , que muestran niveles de
MP numéricamente más bajos que los encontrados
en nuestro trabajo. Estos resultados se obtuvieron
después de ser lavados y pasar por un proceso de
digestión acida lo que puede afectar al proceso de
extracción MP, debido a que la digestión acida no
es la óptima para este tipo de ensayos por que
tiende a degradar las fibras plásticas (Van
Cauwenbergue et al., 2014; Miller et al., 2017).
Estudios en el Golfo Pérsico encontraron una alta
concentración de MP en una diversidad de especies
-1
marinas de 12,8 a 20,0 ítems·g y en bivalvos
-1
estudiados encontró de 0,2 a 2,2 ítems·g
resultados similares a los encontrados en este
estudio, demostrando así que no solo los bivalvos
están contaminados sino también otros tipos de
invertebrados que se encuentran por debajo de la
cadena trófica (Naji et al., 2018).
Se determinó cuál fue el procedimiento más eficaz
durante la digestión de la materia orgánica con
peróxido de hidrogeno (H O ), y la flotación y
2 2
filtración de los MP usando a C. chorus para esta
estandarizacion.
Durante la digestión con H O el envase más
2 2
adecuado fue la botella de vidrio de transparente de
1 L con 2 cm de abertura y 25 cm de altura. El
volumen de H O al 30% que permitió la mejor
2 2
digestión de la materia orgánica al 99% en C.
chorus fue 18 g en 200 mL de H O . El baño maría
2 2
fue más eficaz que el oscilador magnético, púes
permite evaluar y un mayor número de muestras,
con oscilación y temperatura constante hasta las 48
h de digestión.
Durante la flotación y filtración de MP, se llenó
hasta los ¾ de botella de un L con solución salina
saturada y luego emplear una pipeta de vidrio
volumétrica de 10 mL para sacar el sobrenadante
con mucho cuidado y vaciar el contenido en una
placa Petri de vidrio limpia mostró ser el mejor
método de flotación para la extracción de MP a
utilizar.
Se obtuvo 2 tipos de MP fibras que son las más
abundantes, mostrando colores rojo azul y blanco;
pellets de color amarillo y blanco, con
concentraciones bajas en comparación de las
revisiones realizadas en el otro lado del mundo.
Los bivalvos no solo filtran MP si no también
meso-plásticos de un tamaño entre 5 mm y 20 mm.
Finalmente, es nuestros resultados evidencian que
es urgente la estandarización de protocolos para
MP para una coherente recopilación y análisis de
datos. Métodos armonizados, rápidos y
reproducibles permitirán una evaluación más
precisa de los impactos y riesgos que los MP
representan para la biota, en especial para los
bivalvos marinos y aumentarán la comparabilidad
entre las investigaciones internacionales.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Andrady, A.L. 2017. The plastic in microplastics: A
review. Marine Pollution Bulletin, 119: 12-
22.
Área Funcio n al de In v est i gac i o nes en
Biodiversidad (AFIB) - Dirección General
de Investigaciones de Recursos Demersales
y Litorales (DGIRDL). 2016. Guía ilustrada
para reconocimiento de especies de
moluscos bivalvos con valor comercial, Vol.
2. Industria Gráfica O'Diana, pp.1-88.
Ashton, K.; Holmes, L. & Turner, A. 2010.
Association of metals with plastic
pr od uc t ion p el let s in th e m ari ne
environment. Marine Pollution Bulletin, 60:
2050–2055.
Avendaño, M. & Cantillánez, M. 2011.
Reestablecimiento de Choromytilus chorus
(Molina, 1782) (Bivalvia: Mytilidae) en el
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Valencia-Velasco et al.
130
norte de Chile. Latin American Journal of
Aquatic Research, 39: 390-396.
Avio, C.G.; Gorbi, S.; Milan, M.; Benedetti, M.;
Fattorini, D.; d'Errico, G.; Pauleto, M.;
Bargelloni, L & Regoli, F. 2015. Pollutants
bioavailability and toxicological risk from
micr op l as t ic s to marin e mu ss e ls .
Environmental Pollution, 198: 211-222.
Baechler, B.R.; Granek, E.F.; Hunter, M.V. &
C o n n , K . E . 2 0 2 0 . M i c r o p l a s t i c
concentrations in two Oregon bivalve
species: Spatial, temporal, and species
variability. Limnology and Oceanography
Letters, 5: 54–65.
Barboza, L.G.A.; Frias, J.P.G.L.; Booth, A.M.;
Vieira, L.; Masura, J.; Baker, J.; Foster, G. &
Guilhermino, L. 2019. Microplastics
Pollution in the Marine Environment. In:
Sheppard, C. (Comp.). World Seas: An
Environmental Evaluation. Volume III:
Ecological Issues and Environmental
Impacts. Elsevier. Países Bajos. pp. 329-
351.
Benítez, S.; Lagos, N.A.; Osores, S.; Opitz, T.;
Duarte, C.; Navarro, J.M.; Lardies, M.A.
2018. High pCO levels affect metabolic
2
rate, but not feeding behavior and fitness, of
farmed giant mussel Choromytilus chorus.
Aquaculture Environment Interactions, 10:
267–278.
Claessens, M.; Van Cauwenberghe, L.;
Vandegehuchte, M.B. & Janssen, C.R. 2013.
New techniques for the detection of
microplastics in sediments and filed
collected organisms. Marine Pollution
Bulletin, 70: 227-233.
Covernton, G.A.; Collicutt, B.; Gurney-Smith,
H.J.; Pearce, C.M.; Dower, J.F.; Ross, P.S. &
Dudas, S.E. 2019. Microplastics in bivalves
and their habitat in relation to shellfish
aquaculture proximity in coastal British
C o l u m b i a , C a n a d a . A q u a c u l t u r e
Environment Interactions, 11: 357–374.
Derraik, J.G.B. 2002. The pollution of the marine
environment by plastic debris: a review.
Marine Pollution Bulletin, 44: 842–852.
De Witte, B.; Devriese, L.; Bekaert, K.; Hoffman,
S.; Vandermeersch, G.; Cooreman, K. &
Robbens, J. 2014. Quality assessment of the
blue mussel (Mytilus edulis): Comparison
between commercial and wild types. Marine
Pollution Bulletin, 85: 146-155.
De-la-Torre, G. 2019a. Microplásticos en el medio
marino: una problemática que abordar.
Revista Ciencia y Tecnología, 15: 27-37.
De-la-Torre G.E. 2019b. Microplastics: an
emerging threat to food security and human
health. Journal of Food Science and
Technology, 1-8.
De-la-Torre, G.; Mendoza-Castilla, L., & Pilar, R.
2019a. Microplastic contamination in
market bivalve Argopecten purpuratus from
Lima, Peru. Manglar, 16: 85-89.
De-la-Torre G.E. Dioses-Salinas DC, Pérez-Baca
BL, & Santillán L. 2019b. Microplastic
abundance in three commercial fish from the
coast of Lima, Peru. Brazilian Journal of
Natural Sciences, 2:171-171.
De-la-Torre G.E., Apaza-Vargas D.M., & Santillán
L. 2019c. Microplastic ingestion and
feeding ecology in mollusks from the coast
of Lima, Peru. Environmental Pollution,
244: 522-533.
De-la-Torre, G.E.; Dioses-Salinas, D.C.; Castro,
J.M.; Antay, R.; Yupanqui-Fernández, N.;
Dante Espinoza-Morriberón, D. & Saldaña-
Serrano, M. 2020. Abundance and
distribution of microplastics on sandy
beaches of Lima, Peru. Marine Pollution
Bulletin, 151: 110877.
El Peruano, 2018. Ley que regula el plástico de un
solo uso y los recipientes o envases
descartables. Ley Nº 30884. El Peruano.
Miércoles 19 de diciembre de 2018. En:
https://busquedas.elperuano.pe/download/u
rl/ley-que-regula-el-plastico-de-un-solo-
uso-y-los-recipientes-ley-n-30884-
1724734-1
Engler, R.E. 2012. The complex interaction
between marine debris and toxic chemicals
in the ocean. Environmental science &
technology, 46: 12302-12315.
Fang, C.; Zheng, R.; Chen H.; Hong, F.; Lin, L.;
Lin, H.; Guo, H.; Bailey, C.; HelmutSegner,
H.; Mu. J. & Bo, J. 2019. Comparison of
microplastic contamination in fish and
bivalves from two major cities in Fujian
province, China and the implications for
human health. Aquaculture, 512: 734322.
Galloway, T.S. 2015. Micro- and Nano-plastics
and Human Health. In: Bergmann, M.;
Gutow, L. & Klages, M. (eds) Marine
Anthropogenic Litter. Springer, Cham.
GESAMP (Group of Experts on the Scientific
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Microplastics in marine bivalves
131
Aspects of Marine Environmental
Protection). 2019. Guidelines or the
monitoring and assessment of plastic litter
and microplastics in the ocean (Kershaw,
P.J.; Turra, A. & Galgani, F. eds.),
( I M O / F A O / U N E S C O -
IOC/UNIDO/WMO/IAEA/UN/UNEP/UND
P/ISA Joint Group of Experts on the
Scientific Aspects of Marine Environmental
Protection). Rep. Stud. GESAMP No. 99,
130p.
Gonzales, A.M. & Espinoza, L.A. 2020. Efecto de
la pesca artesanal de Aulacomya atra
(Mollusca: Mytilidae) en la sostenibilidad
del recurso. Avances, 22: 64-80.
Granek, E.F.; Brander, S.M. & Holland, E.B.
2020. Microplastics in aquatic organisms:
Improving understanding and identifying
research directions for the next decade.
Limnology and Oceanography Letters, 5:
1–4.
Hidalgo-Ruz, V.; Gutow, L.; Thompson, R.C.;
Thiel, M. 2012. Microplastics in the Marine
Environment: A Review of the Methods
Used for Identification and Quantification.
Environmental Science & Technology,
46:3060-3075.
Iannacone, J.; Huyhua, A.; Alvariño, L.; Valencia,
F.; Principe, F.; Minaya, D.; Ortega, J.;
Argota, G. & Castañeda, L. 2019.
Microplásticos en la zona de marea alta y
supralitoral de una playa arenosa del litoral
costero del Perú. The Biologist (Lima), 17:
335-346.
IMARPE (Instituto del Mar Peruano). 2016. Guía
de campo ilustrada para reconocimiento de
especies de moluscos bivalvos con valor
comercial. Serie de divulgación científica.
Vol 2.N°1. Industria Gráca O'Diana. 84 p.
Jabeen, K.; Su, L.; Li, J.; Yang, D.; Tong, C.; Mu, J.
& Shi, H. 2017. Microplastics and
mesoplastics in fish from coastal and fresh
waters of China. Environmental Pollution,
221: 141-149.
Jambeck, J.R.; Geyer, R.; Wilcox, C.; Siegler, T.R.;
Perryman, M.; Andrady, A.; Narayan, R. &
Law, K.L. 2015. Plastic waste inputs from
land into the ocean. Science, 347: 768-771.
Kolandhasamy, P.; Su, L.; Li, J.; Qu, X.; Jabeen, K.
& Shi, H. 2018. Adherence of microplastics
to soft tissue of mussels: A novel way to
uptake microplastics beyond ingestion.
Science of the Total Environment, 610-611:
635-640.
Li, J.; Yang, D.; Li, L.; Jabeen, K. & Shi, H. 2015.
Microplastics in commercial bivalves from
China. Environmental Pollution, 207:
190–195.
Li, J.; Qu, X.; Su, L.; Zhang, W.; Yang, D.;
Kolandhasamy, P.; Li, D. & Shi, H. 2016.
Microplastics in mussels along the coastal
waters of China. Environmental Pollution,
214: 177–184.
Li, J.; Green, C.; Reynolds, A.; Shi, H. & Rotchell,
J.M. 2018. Microplastics in mussels
sampled from coasta l water s and
supermarkets in the United Kingdom.
Environmental pollution, 241: 35-44.
Lusher, A.L.; Welden , N.A.; Sobral, P. & Cole, M.
2017. Sampling, isolating and identifying
microplastics ingested by fish and
invertebrates. ) Analytical Methods, 9:
1346-1360.
Mathalon, A. & Hill, P. 2014. Microplastic fibers in
the intertidal ecosystem surrounding
Halifax Harbor, Nova Scotia. Marine
Pollution Bulletin, 81: 69-79.
Miller, M.E.; Kroon, F.J. & Motti, C.A. 2017.
Recovering microplastics from samples: A
Review of current practices. Marine
Pollution Bulletin, 123: 6-18.
Naji, A.; Nuri, M. & Vethaak, A.D. 2018.
Microplastics contamination in molluscs
from the northern part of the Persian Gulf.
Environmental pollution, 235: 113-120.
NG (National Geographic). 2020. 20 datos sobre el
problema del plástico en el mundo.
Miércoles 22 de abril de 2020. En:
https://www.nationalgeographic.com.es/mu
ndo-ng/20-datos-sobre-problema-plastico-
mundo_15282
Ory, N.; Chagnona, C.; Felix, F.; Fernández, C.;
Ferreira, J.L.; Gallardo, C.; Garcés-
Ordóñez, O.; Henostroza, A.; Laaz, E.;
Mizraji, R.; Mojica, H.; Murillo-Haro, V.;
Medina, L.O.; Preciado, M.; Sobral, P.;
Urbina, M.A. & Thiel, M. 2018. Low
prevalence of microplastic contamination in
planktivorous fish species from the
southeast Pacific Ocean. Marine Pollution
Bulletin, 127: 211–216.
Paredes, C.; Cardoso, F.; Santamaría, J.; Esplana,
J. & Llaja, L. 2016. Lista anotada de los
bivalvos marinos del Perú. Revista peruana
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Valencia-Velasco et al.
132
de biología, 23: 127-150.
Paul-Pont, I.; Lacroix, C.; Fernández, C. G.;
Hégaret, H.; Lambert, C.; Le Goïc, N.; Frere,
L.; Cassone, A.; Sussarellu, R.; Fabioux, C.;
Guyomarch, J.; Albentosa, M.; Huvet, A &
Soudant, P. 2016. Exposure of marine
mussels Mytilus spp. to polystyrene
microplastics: toxicity and influence on
f l u o r a n t h e n e b i o a c c u m u l a t i o n .
Environmental Pollution, 216: 724-737.
Phuong, N.N.; Poirier, L.; Pham, Q.T.; Lagarde, F.;
Zalouk-Vergnoux, A. 2018a. Factors
influencing the microplastic contamination
of bivalves from the French Atlantic coast:
Location, season and/or mode of life?.
Marine Pollution Bulletin, 129: 664-674.
Phuong, N.N.; Zalouk-Vergnoux, A.; Kamari, A.;
Mouneyrac, C.; Amiard, F.; Poirier L. &
Lagarde, F. 2018b. Quantification and
characterization of microplastics in blue
mussels (Mytilus edulis): protocol setup and
preliminary data on the contamination of the
French Atlantic coast. Environmental
Science and Pollution Research, 25,
6135–6144.
Purca, S. & Henostroza, A. 2017. Presencia de
microplásticos en cuatro playas arenosas de
Perú. Revista peruana de biología, 24: 101-
106.
Prata, J. C.; da Costa, J. P.; Lopes, I.; Duarte, A. C.
& Rocha-Santos, T. 2019. Environmental
exposure to microplastics: an overview on
possible human health effects. Science of the
Total Environment, 13: 44-55.
PRODUCE (Ministerio de la Producción). 2018a.
Anuario Estadístico Pesquero y Acuícola
2017. Ministerio de la producción. Produce.
Lima, Perú. 205 p.
PRODUCE (Ministerio de la Producción). 2018b.
Declaran en recuperación al recurso
hidrobiológico choro y crean Comisión
Sectorial de Trabajo Técnico. Resolución
Ministerial N° 506-2018-PRODUCE.
Normas Legales El Peruano. 13 de
noviembre del 2018.
Rezania, S.; Park, J.; Din, M.F.M.; Taib, S.M.;
Talaiekhozani, A.; Yadav, K.K. & Kamyab,
H. 2018. Microplastics pollution in different
aquatic environments and biota: A review of
recent studies. Marine Pollution Bulletin,
133: 191-208.
Ríos, V.; Ocampo, N. & Astorga-España, M.S.
2018. Composición química proximal y
morfometría de cholga (Aulacomya ater,
Molina, 1782) y chorito (Mytilus chilensis,
Hupé, 1854) comercializados en la Región
de Magallanes. Anales Instituto Patagonia
(Chile), 46:49-58.
Rochman, C.M.; Kurobe, T.; Flores, I. & Teh, S.J.
2014. Early warning signs of endocrine
disruption in adult fish from the ingestion of
polyethylene with and without sorbed
chemical pollutants from the marine
environment. Science of the Total
Environment, 493: 656-661.
Salim, S. Y.; Kaplan, G.G. & Madsen, K.L. 2014.
Air pollution effects on the gut microbiota: a
link between exposure and inflammatory
disease. Gut microbes, 5: 215-219.
Smith, L.E. 2018. Plastic ingestion by Scyliorhinus
canicula trawl captured in the North Sea.
Marine Pollution Bulletin, 130: 6–7.
Solís, M.A.; Ballesteros, M. & Riascos, J.M. 2019.
The early life history transitions of the
bivalve Aulacomya atra from the Humboldt
Current System off Peru are affected by
human exploitation and modulated by El
Niño–La Niña cycle. Frontiers in Marine
Science, 6: 496.
Thiele, C.J.; Hudson, M.D. & Russell, A.E. 2019.
Evaluation of existing methods to extract
microplastics from bivalve tissue: Adapted
KOH digestion protocol improves filtration
at single-digit pore size. Marine Pollution
Bulletin, 142: 384–393.
Van Cauwenberghe, L. & Janssen, C.R. 2014.
Microplastics in bivalves cultured for
human consumption. Environmental
pollution, 193: 65-70.
Vandermeersch, G.; Van Cauwenberghe, L.;
Janssen, C. R.; Marques, A.; Granby, K.;
Fait, G.; Kotterman, M. J.J.; Diogène, J.;
Bekaert, K..; Robbens, J. & Devriese, L.
2015. A critical view on microplastic
quantification in aquatic organisms.
Environmental Research, 143, Part B: 46-
55.
Von Friesen, L.W.; Granberg, M.E.; Hassellöv, M.;
Gabrielsen, G.W. & Magnusson, K. 2019.
An efficient and gentle enzymatic digestion
protocol for the extraction of microplastics
from bivalve tissue. Marine Pollution
Bulletin, 142: 129–134.
Von Moos, N.; Burkhardt-Holm, P. & Köhler, A.
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Microplastics in marine bivalves
133
2012. Uptake and effects of microplastics on
cells and tissue of the blue mussel Mytilus
edulis L. after an experimental exposure.
Environmental science & technology, 46:
11327-11335.
Wang, J.; Tan, Z.; Peng, J.; Qiu, Q. & Li, M. 2016.
The behaviors of microplastics in the marine
environment. Marine Environmental
Research, 113: 7-17.
Woodall, L.C.; Sanchez-Vidal, A.; Canals, M.;
Paterson, G.L.J.; Coppock, R.; Sleight, V.;
Calafat, A.; Rogers, A.D.; Narayanaswamy,
B.E. & Thompson, R.C. 2014. The deep sea
is a major sink for microplastic debris. Royal
Society Open Science, 1: 140-317.
The Biologist (Lima). Vol. 18, Nº1, jan - jun 2020
Valencia-Velasco et al.
Received April 12, 2020.
Accepted April 28, 2020.
134