@article{Frango-Ramos_Delgado_Catalano-Donaire_Arzapalo_Incani-Cotognini_Perteguer-Prieto_Ferrer-Jesús_2021, title={ESTANDARIZACIÓN DE LA TÉCNICA DE PCR PARA LA DETECCIÓN DE LA SECUENCIA ITS1 DE NECATOR AMERICANUS (STILES, 1902) Y CLONACIÓN DEL PRODUCTO PARA SU USO COMO CONTROL}, volume={15}, url={https://revistas.unfv.edu.pe/NH/article/view/1197}, DOI={10.24039/rnh20211521197}, abstractNote={<p>La anquilostomiasis generalmente se produce por <em>Necator americanus </em>(Stiles, 1902), y ocasiona síntomas digestivos y anemia. El diagnóstico por coprología tiene sensibilidad baja en las cargas parasitarias leves. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica sensible y específica, que debe ser adaptada a las condiciones de laboratorio, donde se necesitan controles positivos. El objetivo de este trabajo fue la estandarización de la técnica de PCR para la amplificación de la secuencia ITS-1 de <em>N. americanus </em>en muestras de heces y su clonación para el uso como control. Se estandarizaron tres protocolos de extracción de ADN (Fenol/cloroformo, Precipitación salina, y Resina Chelex® 100). Se determinaron las concentraciones óptimas de reactivos (MgCl , BSA, dNTP, cebadores, y Taq polimerasa), así como, la 2 temperatura de hibridación y número de ciclos. Se determinó la sensibilidad y especificidad analítica de la técnica. Para la clonación, la secuencia ITS-1 amplificada por PCR, se purificó y se ligó con el vector pGEM-T-Easy. Se transformaron células competentes <em>E. coli </em>XL1Blue MRF` con la mezcla de ligación (pGEM-T-easy-Na-ITS1), se identificaron las colonias recombinantes y luego se extrajo el ADN plasmídico. El mejor protocolo de extracción de ADN fue el fenol/cloroformo, las condiciones óptimas de la PCR fueron; MgCl 1,5 mM, BSA 0,5 mg/mL, dNTP 100 μM, cebadores 0,6 μM, y Taq polimerasa 1 U, 2 56 °C de temperatura de hibridación y 40 ciclos. Las cantidades óptimas determinadas de los reactivos permitieron ahorro de los mismos. Se obtuvo 100% de especificidad y una sensibilidad analítica de 10 pg de ADN (extraído de muestras de heces) y 10 ag del plásmido (con la secuencia clonada), que funcionó como control positivo.</p>}, number={2}, journal={Neotropical Helminthology}, author={Frango-Ramos, Alberto and Delgado, Ronaldo and Catalano-Donaire, Emily and Arzapalo, Jhon Jesús- and Incani-Cotognini, Renzo Nino and Perteguer-Prieto, María Jesús and Ferrer-Jesús, Elizabeth}, year={2021}, month={ago.}, pages={149–161} }