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Neotrop. Helminthol., 8(1), 2014
2014 Asociación Peruana de Helmintología e Invertebrados Afines (APHIA)
ISSN: 2218-6425 impreso / ISSN: 1995-1043 on line
ORIGINAL ARTICLE / ARTÍCULO ORIGINAL
APPLICATION TO SMALL-SCALE FIELD OF STEINERNEMA RIOBRAVIS CABANILLAS,
POINAR & RAULSTON, 1994 (NEMATODA, STEINERNEMATIDAE), THERMO TRILOGY
STRAIN AGAINST NEOCURTILLA CLARAZIANA (SAUSSURE, 1874) (ORTHOPTERA,
GRYLLOTALPIDAE) IN GARDENS OF LA PLATA, ARGENTINA
APLICACIÓN A CAMPO A PEQUEÑA ESCALA DE STEINERNEMA RIOBRAVIS CABANILLAS,
POINAR & RAULSTON, 1994 (NEMATODA, STEINERNEMATIDAE), CEPA THERMO
TRILOGY CONTRA NEOCURTILLA CLARAZIANA (SAUSSURE, 1874) (ORTHOPTERA,
GRYLLOTALPIDAE) EN JARDINES DE LA PLATA, ARGENTINA
2,3 1,3
Guillermo R. Reboredo ; Nora B. Camino
Abstract
Steinernema riobravis Cabanillas, Poinar & Raulston, 1994, Thermo Trilogy strain (Nematoda,
Steinernematidae) was the nematode species used for application to small-scale field against
Neocurtilla claraziana (Saussure, 1874) (Orthoptera, Gryllotalpidae), a pest of soil in three
gardens of Gran La Plata, Argentina. Assays were performed with dosages of 6,000, 10,000,
2 2
20,000, 40,000 and 80,000 nematodes per 3 m , with a density of 32 ± 7 mole crickets/3 m . The
application was performed with hand sprayer. The percentages of effectiveness varied in different
gardens, the first lower dose was 65% ± 15.67 and the highest dose was 83% ± 22.25, with ± 80%
being the average dose 18.56. For the second garden 50% ± 8.31 for the low dose and 76% ± 21.15
for medium and higher, and for the third garden the lower dose was 42 ± 15.87%, the highest dose
of 66% ± 18.32 and the mean dose of 60 ± 17.92%. We observed in the first three days post-
treatment the highest percentages of infection for all doses, on day seven effectiveness for
different doses significantly decreased nearing the end of post-treatment (day 31) with 0% for the
three trials. This study demonstrated the potential of entomopathogenic nematodes as biological
control agents, resulting in the introduced entomonematodo as an effective biological control
agent for mole crickets.
Keywords: Steinernema riobravis.Argentina - biocontrol assays - mole cricket -
Suggested citation: Reboredo, GR & Camino, NB. 2014. Application to small-scale field of Steinernema riobravis Cabanillas,
Poinar & Raulston, 1994 (Nematoda, Steinernematidae), thermo trilogy strain against Neocurtilla claraziana (Saussure, 1874)
(Orthoptera, Gryllotalpidae) in gardens of La Plata, Argentina. Neotropical Helminthology, vol. 8, n°1, jan-jun, pp. 77 - 83.
1 2 3
Investigador CIC. Profesional de Apoyo CONICET. Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectores, CEPAVE, Consejo Nacional de Investigaciones
Científicas y tecnológicas, CONICET - Universidad Nacional de La Plata, UNLP - Comisión de Investigaciones Científicas de la provincia de Buenos
Aires, CIC. Calle 122 y 60, 1900 La Plata
nemainst@cepave.edu.ar
Reboredo& Camino
Application of Steinernema against Neocurtilla
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Resumen
Palabras clave: Argentina - ensayos de biocontrol – grillotopo - Steinernema riobravis.
Steinernema riobravis Cabanillas, Poinar & Raulston, 1994, cepa Thermo Trilogy (Nematoda,
Steinernematidae) fue la especie de nemátodo utilizada para la aplicación en campo a pequeña
escala contra Neocurtilla claraziana (Saussure, 1874) (Orthoptera, Gryllotalpidae), una plaga del
suelo en tres jardines del Gran La Plata, Argentina. Los ensayos se realizaron con las dosis de
2
6.000, 10.000, 20.000, 40.000 y 80.000 nemátodos por 3 m , con una densidad de 32 ± 7
2
grillotopos/3 m . La aplicación fue realizada con un pulverizador manual. Los porcentajes de
efectividad registrados en los diferentes jardines variaron, entre 65% ± 15,67 para la dosis menor y
83% ± 22,25 para la mayor, con un 80% ± 18,56 para la dosis media. Para el segundo jardín 50% ±
8,31 para la dosis menor y 76% ± 21,15 para la media y mayor, y para el tercer jardín 42% ± 15,87
para la dosis menor, 66% ± 18,32 para la mayor y 60% ± 17,92 para la dosis media. Registrándose
en los tres primeros días post-tratamiento los mayores porcentajes de infección para todas las
dosis. En el día siete la efectividad para las diferentes dosis disminuyó significativamente
llegando al final del post-tratamiento (día 31) con un 0% para los tres ensayos. Este estudio
demostró el uso potencial de nemátodos entomopatógenos como agentes de control biológico,
resultando este entomonemátodo introducido en un eficaz agente de control biológico para
grillotopos.
o lombrices. Hasta el momento esta plaga
generalmente es tratada sólo con productos
químicos perjudiciales para el ambiente como
son los insecticidas fosforados, carbamatos,
piretroides o fipronil (Ware & Whitacre, 2004).
Mediante este proceso, el grillotopo toma
contacto con el insecticida y muere. El uso de un
entomonemátodo patógeno para el control de
esta plaga constituye una alternativa biológica,
eficaz, sana y comprometida con el ambiente
(Frank & Walker, 2006). Las especies del género
Steinernema Travassos, 1927, corresponden a
nemátodos entomopatógenos (EPN)
mutuamente asociados con una bacteria
entérica, que se utilizan a nivel mundial para el
control biológico de insectos. Ellos controlan
una amplia e importante lista de hospedadores
(Travassos, 1927).
Los nemátodos constituyen un grupo de
parásitos y patógenos comunes en insectos que
pueden producir importantes epizootias
naturales con elevadas prevalencias (Frank &
Walker, 2006). Son capaces de regular las
poblaciones de insectos y mantenerlas por
debajo de los niveles de daño económico. La
El daño que ocasionan los grillotopos en el suelo
es de gran consideración, ya que destruyen gran
parte de la cubierta herbácea y cultivos
hortícolas (Singh Somvanshi et al., 2006). El
grillotopo es un insecto dañino del suelo, se
alimenta de las raíces siendo su acción
fácilmente visible en el terreno. Son insectos
masticadores que construyen galerías
subterráneas, con sus patas anteriores
desarrolladas, desde donde atacan los tubérculos
y raíces del césped y de todo tipo de plantas,
llegando a ser una verdadera plaga en época
estival. El grillotopo ocasiona severos
problemas en jardines, sembradíos, canchas de
golf, rugby, football, etc., manifestándose como
si el suelo quedara sin vegetación, apareciendo
sectores de césped amarillo al principio, luego
manchones sin pasto y manifiestas áreas sin
cubierta vegetal (Frank et al., 1999).
La primera manifestación de su existencia son
pequeños montículos de tierra floja, fáciles de
apreciar fundamentalmente por la mañana,
siendo confundidos como actividad de hormigas
INTRODUCCIÓN
79
Los ensayos se realizaron en cuatro
oportunidades con un espacio de tiempo de 32
días en cada uno de los predios seleccionados,
utilizando para cada uno las siguientes dosis,
obtenidas por el método volumétrico, en una
relación de 6.000 (dosis menor), 10.000, 20.000,
40.000 y 80.000 (dosis mayor) nemátodos para
2
la unidad de 3 m , con una densidad de 32 ± 7
2
grillotopos/3 m (dato obtenido con muestreos al
azar 24 h antes del ensayo). La aplicación fue
realizada en suspensión con pulverizador
manual de 1 L de capacidad en agua destilada
esterilizada (dureza suave: 70mg/L,
conductividad: máx. 2 µs, pH 25°C: 7.00).
La experiencia se realizó en la primavera de
octubre-noviembre de 2010, fecha de mayor
actividad de la plaga que coincide con el inicio
del período estival con humedad relativa del
60%. Las aplicaciones se efectuaron en las
primeras h de la mañana para evitar los rayos
ultravioleta y la evaporación del agua que
dañarían el accionar de los nemátodos. El
protocolo de las experiencias requirió un riego
-2
de 1,7 mL·m previo y posterior a la aplicación
del nemátodo, para que estos se dispersen
atravesando el mantillo herbáceo (altura de 5
cm). La temperatura del suelo a cm de
profundidad fue de 16ºC ± 2, pH de 6,8-7,2 y la
humedad del suelo entre 18 y 23%, para cada
jardín. S. riobravis se aplicó con pulverizador,
evitando las unidades testigos. Luego de la
aplicación se tomaron muestras en cada parcela
de aplicación y en las control (n = 5), tarea que se
llevó a cabo manualmente con pala (10 x 10 x 10
cm) a las 24, 48 y 72 h y luego cada 4 días hasta
completar el mes de post-aplicación sumando un
total de nueve muestras. Los grillotopos
capturados eran colocados en cápsulas de Petri
para determinar la infección y aquellos que
mostraban síntomas de estar parasitados (ninfas
momificadas) se colocaron en trampas de White
(25ºC ± 2) para recuperar los nemátodos
(Woodring & Kaya, 1988).
Los porcentajes de efectividad hallados en los
diferentes jardines (promedio ± desviación
familia Steinernematidae del orden Rhabditida
posee características que los convierten en
excelentes candidatos como agentes de
biocontrol, entre ellas, su elevada patogenicidad
y virulencia, persistencia en el medio,
especificidad relativamente alta y factibilidad de
cultivo y producción (García et al., 2008). Por lo
que el objetivo de este trabajo es demostrar la
efectividad de este nemátodo contra grillotopos
en la zona de Buenos Aires, Argentina.
El entononemátodo Steinernema riobravis
Cabanillas, Poinar & Raulston, 1994, cepa
Thermo Trilogy fue producido y mantenido in
vivo en el laboratorio (Poinar, 1979; Cabanillas
et al., 1994) con Galleria mellonella (Linnaeus,
1758) (Lepidoptera: Pyralidae) realizando
infecciones directas. La colonia fue establecida
en el Centro de Estudios Parasitológicos y de
Vectores, CEPAVE, Argentina. Se realizaron
primeramente bioensayos preliminares en el
laboratorio, respetando las infecciones y el
tiempo de cuarentena. Se utilizaron 10 larvas del
to
4 estadío del lepidóptero, poniéndose en
contacto con 60 juveniles infectantes (JI) por
larva del insecto (60 JI/larva). Los JI fueron
almacenados en agua destilada a 10º C en
frascos plásticos de cultivo de tejidos, teniendo
una antigüedad no mayor de 2 meses.
Los tres jardines fueron seleccionados a raíz de
consultas de particulares sobre el daño que estos
insectos ocasionaban en el césped y el
conocimiento sobre el uso de insecticidas
domésticos (fosforados, carbamatos, piretroides
o fipronil) con la posible intoxicación de niños y
mascotas. Los jardines seleccionados en el Gran
La Plata fueron tres: en City Bell (34º
52´1,41´´S, 58º 02´48,27´´O), Tolosa
(34º53´40,63´´S, 57º58´52,92´´O) y Gonnet
Bell (34º53´11,25´´S, 58º02´º8,41´´O). En cada
uno de los jardines se dividió el terreno a tratar
2
en parcelas tomadas al azar de 3 m (n = 5)
separadas 1 m de las parcelas control (n = 5) que
no tuvieron la aplicación del nemátodo.
MATERIAL Y MÉTODOS
Neotrop. Helminthol., 8(1), 2014
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
estándar) variaron, para el de City Bell (Fig. 1)
entre 65% ± 15,67 para la dosis menor y 83% ±
22,25 para la mayor, con un 80% ± 18,56 para la
dosis media. Para el jardín de Tolosa (Fig. 2)
50% ± 8,31 para la dosis menor y 76% ± 21,15
para la media y mayor, y para el jardín de Gonnet
Bell (Fig. 3) 42% ± 15,87 para la dosis menor,
66% ± 18,32 para la mayor y 60% ± 17,92 para la
dosis media. No se observó diferencias
significativas entre los tres jardines, ni
diferencias en la mortalidad del insecto en las
parcelas control de cada uno de los mismos, pero
se evidenció el accionar del grillotopo que
provocó daños significativos en el suelo,
evidenciándose por los clásicos manchones de
ausencia de césped.
Como se observa en las tres gráficas (Figs. 1, 2 y
3) el comportamiento del nemátodo sobre el
grillotopo fue semejante, registrándose en los
tres primeros días post-tratamiento los mayores
porcentajes de infección para todas las dosis,
siendo para el primer jardín 75,8% ± 9,87, para el
segundo 66,2% ± 10,07 y para el tercer jardín
55,47% ± 8,89. En el día 7 la efectividad para las
diferentes dosis disminuyó significativamente;
en el primero disminuyó a 40,4% ± 6,80 la
infección, en el segundo a 37,6% ± 7,19 y en el
tercero a 28% ± 5,83, llegando al final del post-
tratamiento (días 11 al 31) con los siguientes
porcentajes de infección, para el día 11 en el
primer jardín mostró un 28% ± 9,77, para el
segundo 23,6% ± 8,73 y para el tercero 17% ±
9,30, terminando el día 31 con un 0% para los
tres ensayos.
Las dosis óptimas registradas fueron las de
10.000 y 20.000 nemátodos para la unidad de 3
2
m ; con estas dosis se obtiene un resultado
satisfactorio de infección durante los primeros
tres días de aplicación, disminuyendo la
población de grillotopos a un 20%
aproximadamente, cantidad cuyo accionar no
provoca daño significativo. Las dosis superiores
(40.000 y 80.000) si bien mostraron un resultado
parecido a las menores, económicamente no son
eficaces ya que demandarían más cantidad de
nemátodos por hospedador para obtener el
mismo resultado, es decir aumentaría el costo de
su producción.
Reboredo& Camino
Application of Steinernema against Neocurtilla
La utilización de este enemigo natural podría
constituir un elemento más del manejo integrado
de plagas, ya que reduce la población de la
misma. La finalidad de la introducción y
colonización de este patógeno, liberado en un
ambiente en el que no se encuentra presente, fue
la de establecerse en el espacio y el tiempo
(Frank & Walker, 2006).
Además es importante el manejo del
agroecosistema y del patógeno, los cuales se
refieren a aquellas prácticas que favorezcan la
permanencia del entomonemátodo en la
población hospedadora. Los factores
involucrados en los procesos epizoóticos son
muy variados y pueden relacionarse con la
susceptibilidad del hospedador al patógeno
(comportamiento, fisiología) factores
relacionados con la población del patógeno
(patogenicidad, infección, virulencia) y factores
ambientales tales como temperatura, humedad,
suelo, agroquímicos, etc.
Para nuestra experiencia, la técnica de
aplicación por pulverización fue el método
seleccionado más eficaz para las evaluaciones a
pequeña escala de nematodos en jardines contra
grillotopos, insectos plaga del suelo. Hubo
control, reduciendo la población y los niveles de
daños de la plaga a valores no significativos, lo
que se vio reflejado en la evidente mejora del
césped.
Este estudio demostró el uso potencial de
nemátodos entomopatógenos como agentes de
control biológico, resultando este
entomonemátodo introducido un eficaz agente
de control biológico para grillotopos.
Los autores desean agradecer la inestimable
colaboración brindada por los propietarios de los
jardines donde se llevaron a cabo los ensayos
AGRADECIMIENTOS
80
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
% de Infección
1 2 3 7 11 15 19 23 27
Tiempo en días
6.000
10.000
20.000
40.000
80.000
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Figura 1. Porcentaje de parasitismo en diferentes dosis de Steinernema riobravis en un jardín de de City Bell 30 días post-
tratamiento.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
% de Infección
1 2 3 7 11 15 19 23 27 31
Tiempo en días
6.000
10.000
20.000
40.000
80.000
Figura 2. Porcentaje de parasitismo en diferentes dosis de Steinernema riobravis en un jardín de Tolosa 30 días post-tratamiento.
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Reboredo& Camino
Application of Steinernema against Neocurtilla
0
10
20
30
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50
60
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% de Infección
1 2 3 7 11 15 19 23 27 31
Tiempo en días
6.000
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20.000
40.000
80.000
Figura 3. Porcentaje de parasitismo en diferentes dosis de Steinernema riobravis en un jardín de Gonnet Bell 30 días post-
tratamiento.
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83
