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New species of
Urocleidoides
Neotropical Helminthology (Lima). Vol. 17, N
º
2, jul - dic 2023
Neotropical Helminthology
Neotropical Helminthology, 2023, vol. 17 (2), 145-151
ORIGINAL ARTICLE / ARTÍCULO ORIGINAL
MORPHOLOGY AND CYTOGENETICS OF RHABDITIDA NEMATODES
PARASITISING SPIDERS AND SCORPIONS IN ARGENTINA
MORFOLOGÍA Y CITOGENÉTICA DE NEMÁTODOS RHABDITIDA
PARASITANDO ARAÑAS Y ESCO¿RPIONES EN ARGENTINA
Nora B. Camino
1,2,3*
, Sergio Rodríguez-Gil
1,4
, Guillermo R. Reboredo
1,4
& Sandra E. González
1,3
ISSN Versión Impresa 2218-6425 ISSN Versión Electrónica 1995-1403
DOI: https://dx.doi.org/10.24039/rnh20231721654
Volume 17, Number 2 (jul - dec) 2023
Este artículo es publicado por la revista Neotropical Helminthology de la Facultad de Ciencias Naturales y Matemática, Universidad Nacional Federico
Villarreal, Lima, Perú auspiciado por la Asociación Peruana de Helmintología e Invertebrados Af nes (APHIA). Este es un artículo de acceso abierto,
distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Atribución 4.0 Internacional (CC BY 4.0) [https:// creativecommons.org/licenses/by/4.0/
deed.es] que permite el uso, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que la obra original sea debidamente citada de su fuente original.
ABSTRACT
T e discovery of nematodes in spiders and scorpions from a manual sampling in the city of La Plata, Argentina, revealed
the presence of specimens of the order Rhabditda. T e main objective of this study is to present the presence of nematodes
in the arachnid group, for which there is little precedent. One of the nematodes found belongs to the genus
Rhabditis
Dujardin, 1845, of saprophytic character, characterized by carrying a fungus that kills the host and degrades it to feed
itself. T is was found in the general cavity of the body of the spider
Dysdera crocata
Koch, 1838. It is characterized by
having a thin cuticle, closed labial papillae, a long stoma without teeth, an esophagus with a middle bulb with a valve
and a valved basal bulb, and a middle vulva, short and conical caudal appendage. T e mitotic division is described and
information about the morphology of chromosomes is provided. We carried out a cytogenetic study of the
Rhabditis
, they
showed that they have f ve chromosomes, of which 2 are larger, in metaphase they are acro-telocentric. T e other genus
found is
Cruznema
(Artigas, 1927) Dougherty, 1953, parasite of the intestine of the scorpion
Tityus carrilloi
Ojanguren-
Af lastro, Kochalka, Guerrero-Orellana, Garcete-Barrett, De Roodt, Borges & Ceccarelli, 2021, characterized by having
a cuticle with longitudinal striae and transverse rings, mouth surrounded by six well-separated lips, cuticularized stoma,
long and with three well-developed teeth, esophagus with a strong and muscular middle bulb and a valved basal bulb,
female with a prodelphic ovary, vulva posterior to the half the length of the body, caudal appendage short and conical
Keywords:
Argentina – cytogenetic – nematodes – Rhabditidae – scorpions – spiders
1
Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectores, CEPAVE, Argentina.
2
Universidad Nacional de La Plata, UNLP, Facultad de Ciencias Naturales y Museo, Argentina.
3
Investigador CIC, Comisión de Investigaciones Científ cas de la provincia de Buenos Aires, CIC, Argentina.
4
Consejo Nacional de Investigaciones Científ cas y Técnicas, CONICET, Argentina.
* Corresponding author: nemainst@cepave.edu.ar
Nora B. Camino:
https://orcid.org/0000-0003-4910-3986
Sergio Rodríguez-Gil:
https://orcid.org/0000-0003-4608-1961
Guillermo R. Reboredo:
https://orcid.org/0000-0002-1214-316X
Sandra E. González:
https://orcid.org/0000-0002-0609-0516
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Camino
et al.
RESUMEN
El hallazgo de nematodos en arañas y escorpiones, fruto de habituales y sistemáticos de muestreos manuales de arácnidos
en la ciudad de La Plata, Argentina, reveló la presencia de ejemplares del orden Rhabditda. Este estudio tiene como
objetivo comunicar la presencia de nematodos en el grupo arácnidos, del cual hay escasos y limitados antecedentes. Uno
de los nematodos hallados pertenece al género
Rhabditis
Dujardin, 1845, de carácter saprófto, caracterizado por llevar en
el esófago un hongo que al matar al hospedador lo degrada para poder alimentarse. Este se halló en la cavidad general del
cuerpo de la araña
Dysdera crocata
Koch, 1838. El mismo se caracteriza por tener la cutícula fna, papilas labiales cerradas,
estoma largo, sin dientes, esófago con bulbo medio con valva y bulbo basal valvado, vulva media, apéndice caudal corto y
cónico. Se describe la división mitótica y se aporta información acerca de la morfología de los cromosomas. Se realizó un
estudio citogenético de los
Rhabditis
, los mismos mostraron poseer cinco cromosomas, de los cuales 2 son más grandes,
en metafase, son acro-telocéntricos. El otro género hallado es
Cruznema
(Artigas, 1927) Dougherty, 1953, parásito del
intestino del escorpión
Tityus carrilloi
Ojanguren-Aflastro, Kochalka, Guerrero-Orellana, Garcete-Barrett, De Roodt,
Borges & Ceccarelli, 2021, caracterizado por tener una cutícula con estrías longitudinales y anillos transversales, boca
rodeada de seis labios bien separados, estoma cuticularizado, largo y con tres dientes bien desarrollado, esófago con un
bulbo medio fuerte y musculoso y un bulbo basal valvado, hembra con un ovario prodélfco, vulva posterior a la mitad
de la longitud del cuerpo, apéndice caudal corto y cónico
Palabras claves
: Arañas – Argentina – citogenética – escorpiones – nematodos – Rhabditidae
INTRODUCCIÓN
Las citas sobre los nemátodos parásitos de arañas y es-
corpiones son escasas y fragmentarias mostrando un bajo
porcentaje de parasitismo. Hasta el presente en arañas
se han hallado representantes de la familia Mermithidae
(Poinar, 1985, Košulič & Mašová, 2019), y del orden
Rhabditida (Abolafa & Peña-Santiago, 2018). En escor-
piones se han citado ejemplares de la familia Mermithi-
dae (Poinar & Stockwel, 1988), Telastomatidae (Baruš
& Koubkov, 2002), y se han realizado ensayos con Rhab-
ditida de las familias Steinernematidae y Heterorhabditi-
dae (Gouge
& Snyder, 2005). En 2020, Miranda
et al.
(2020) presentaron en un congreso el hallazgo de ejem-
plares del género
Rhabditis
Dujardin, 1845, en escorpio-
nes de la familia Buthidae de Panamá. La araña
Dysdera
crocata
Koch, 1838 es una especie introducida en Argen-
tina, y la única representante de la familia Dysderidae que
existe en el país. Son arañas cuyo tamaño varía entre 10 y
15mm. Son cazadoras nocturnas y de movilidad errante,
viven gran parte de día en refugios de tela de arañas cons-
truidos bajo piedras o restos de vegetación, en ambientes
antropizados, cerca de casas entre cortezas caídas o restos
de escombros. Estos escorpiones son peligrosos para el
hombre por las características de su veneno, con un ta-
maño promedio de 6.5 cm, y de color amarillo pálido con
tonos marrones. Es una especie principalmente nocturna
que se alimenta de otros artrópodos. Este estudio tiene
como objetivo comunicar la presencia de nematodos en
el grupo arácnidos, del cual hay escasos y limitados ante-
cedentes. Además, de manera complementaria realizamos
por primera vez un estudio citogenético de los rhabditi-
dos hallados en arañas.
MATERIALES Y MÉTODOS
Arañas
: las arañas del género
Dysdera
fueron capturadas
entre septiembre de 2022 y febrero 2023 en Los
Hornos, provincia de Buenos Aires, Argentina. El tipo
de vegetación predominante es pastizal, las arañas fueron
recolectadas en el suelo debajo de hojarasca (34°57’00”S
57°58’00”O). Los nemátodos se obtuvieron de exudados
de hongos saprofíticos de las arañas, que aún no han
sido determinados específcamente. Se analizaron solo
hembras y juveniles debido a la escasez de hallazgos de
ejemplares machos. Las células analizadas pertenecen a
tejidos o a huevos del interior de las hembras.
Escorpiones
: fueron capturados a mano alzada y colocados
vivos en frascos individuales, durante el mes de noviembre
de 2022, en la localidad de La Plata del barrio Gambier,
provincia de Buenos Aires, Argentina (34º56´35´´S
57º58´41´´O). Semanalmente se extraía de los frascos
la materia fecal, la cual fue colocada en alcohol 96º.
Se observó en el microscopio óptico la presencia de
nemátodos.
Nemátodos
: los nemátodos hallados en las arañas que
murieron en el laboratorio se cultivaron en cajas de Petri
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con una película de solución fsiológica comercial, con
sustrato de papel de fltro y una larva de
Tenebrio molitor
Linnaeus, 1758, por cápsula.
En los escorpiones se inspeccionaron las heces donde
fueron hallados los nemátodos,
Estos parásitos vivos se mataron colocándolos en agua
destilada a 60°C durante 2 min. Se fjaron en solución
de TAF (trietanolamina formalina) al 50% en agua
durante 48 h y luego en TAF puro (Poinar, 1975).
Todos los especímenes fueron utilizados para fotografar
en microscopio Olympus BX51 con cámara Olympus
DP71. Se realizaron mediciones de las características
corporales de los nemátodos. Media y entre paréntesis
mínimo y máximo en µm.
Citogenética
: Sólo se pudo hacer este estudio del género
Rhabditis
, ya que se pudo mantener en el laboratorio
sufciente material para el analisis. Para los estudios
citogenéticos se utilizaron nematodos de cultivo, obtenidos
a partir de arañas
Dysdera
y replicado en
T. molitor
.
Ejemplares de diferentes edades fueron colectados con
jeringa para inyección de insulina y fjados en solución de
3:1 (alcohol etílico: ácido acético glacial). Las preparaciones
se realizaron colocando varios ejemplares de nemátodos en
una gota de carmín acético y luego tapados con cubreobjetos.
Se realizaron aplastados hasta lograr una buena dispersión
de células. Estas preparaciones se realizaron mediante la
técnica de squash y se tiñeron con 45% de orceína acética
(Rodríguez-Gil, 2009). Las células representativas de cada
etapa fueron fotografadas con un microscopio Olympus con
cámara digital DP71, usando el programa DP Controller
3.3.1.292, las imagenes fueron procesadas con el programa
GIMP 2.10.30 e INKscape 1.1.2
Las muestras fueron depositadas en la colección
Helmintológica del CEPAVE (Centro de Estudios
Parasitológicos y de Vectores), Argentina.
Aspectos éticos
: Los estudios fueron realizados
cumplimentando las normas éticas de bioseguridad
en laboratorios y siguiendo las buenas prácticas de
experimentación con animales.
RESULTADOS
Rhabditida Chitwood, 1933
Rhabditidae (Oerley, 1880) Travassos, 1920
Rhabditis
Dujardin, 1845
Rhabditis
sp.
Descripción: Nemátodos pequeños y blancos. Cutícula
fina. Seis papilas labiales cerradas. Estoma largo sin dientes,
anisoglotido teniendo las paredes del metarhabdion a
diferentes niveles (Fig. 1a). Esófago con bulbo medio con
valva y bulbo basal valvado (Fig. 1a). Anillo nervioso se
ubica en el itsmo. Poro excretor se abre en la base del
bulbo basal, justo en el comienzo del intestino. Vulva
media, ovarios pares, con un doblez anterior (Fig. 1c),
didélfca (Fig. 1b). Huevos grandes y embrionados (Fig.
1bf). Apéndice caudal corto y cónico (Fig. 1e). Larvas
muy pequeñas (Fig. 1d).
Figura 1
.
Rhabditis
sp. (a-e) a. Extremo anterior de la
hembra, esófago, b. Vulva, huevo, c. Doblez anterior
del ovario, d. Larva, e. Extremo posterior de la hembra,
apéndice caudal. Barras= 100 µm.
Hembras: n= 20. Longitud total del cuerpo: 1080 µm
(900-2050); longitud del estoma: 21 µm (20-22); ancho
del estoma: 4,20 µm (4-4,50); diámetro a nivel de las
papilas cefálicas: 12,80 µm (11,60-14,20); diámetro a
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Camino
et al.
nivel del anillo nervioso: 40,42 µm (38-42,60); diámetro
máximo del cuerpo: 61 µm (56-72); diámetro del cuerpo
a nivel de la vulva: 61,70 µm (58-72); diámetro del
cuerpo a nivel del extremo posterior: 52 µm (45-64);
longitud del esófago: 160 µm (145-210); distancia del
extremo anterior al anillo nervioso: 117 µm (108-125);
distancia del extremo anterior al poro excretor: 162 µm
(148-220); V: 55 % (53-58); longitud y diámetro de los
huevos: 40,42 µm (38,80-42) x 27,66 µm (26-28,75);
longitud del apéndice caudal: 55,30 µm (48-62).
Hospedador
: cavidad general de la araña
D. crocata
.
Localidad
: Los Hornos (34°57’00”S 57°58’00”O), La
Plata, provincia de Buenos Aires, Argentina.
Observaciones
: nematodos sapróftos alimentándose de
exudados del hospedador y de un hongo descomponedor,
notamos que primero permite que se desarrolle el hongo,
y que al matar a la araña el nemátodo puede alimentarse.
Hallamos por primera vez nematodos rhabditidos en
arañas de la especie
D. crocata
para la región de La Plata,
Argentina.
Citogenética de Rhabditis
sp
.
: Los cromosomas son
de tamaño muy pequeño aproximadamente 1 um, se
observaron células con cinco cromosomas, dos de ellos
son aproximadamente el doble de los tres restantes.
Las profases mitóticas muestran pequeños bloques
heteropicnóticos positivo distribuidos a lo largo del
mismo (Fig. 2a), conforme avanza la condensación esos
bloques se agrandan en los dos cromosomas más grandes
y quedan limitados a las zonas telómericas (Fig. 2bd). En
las metafases mitóticas más condensadas se observaron
las cromátides hermanas separadas indicando que los
cromosomas son acro/telocéntricos (Fig. 2e). Las mitosis
encontradas en huevos adentro de las hembras muestran
que durante la profase mitótica hasta la metafase los
cromosomas tienen aspecto diferente a los somáticos,
son más pequeños y las metafases más compactas (Fig.
2 fk), encontrándose solo dos anafases mitóticos en
huevos que no permitieron corroborar la morfología de
los cromosomas inducida en las mitosis somáticas de la
hembra (Fig. 2 lm). En ovarios de hembras se encontraron
menos de 15 células en división meiótica, pudiéndose
distinguir polos con 4 cromosomas y polos con 5 (Fig.
2 op). Estas células reforzarían la hipótesis de que los dos
cromosomas mayores podrían ser autosomas, al igual que
dos de los tres más chicos, en tanto el restante pequeño
podría tratarse de un cromosoma sexual. La tasa de división
fue sumamente baja, encontrándose aproximadamente
entre 5 y 10 células por preparado, en los que había entre
8 y 9 individuos, es decir aproximadamente una célula
en división por individuo. No se encontraron machos.
Todos fueron juveniles o hembras.
Figura 2.
Citogenética de
Rhbaditis
sp. Mitosis en células somáticas de hembras, diferentes estadios (a-e). a. Profase
mitótica; b. Profase mitótica temprana, c. Profase mitótica tardía, d-e. Metafases mitóticas, e-k.Mitosis en huevos,
diferentes grados de condensación, l-m. Anafases mitóticas en huevos, n-o. Metafases II con 2 y 3 cromosomas. Los
círculos delimitan las metafases II. S: núcleo espermático. Barras= 20 µm.
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Morphology and cytogenetics of nematodes
Neotropical Helminthology (Lima). Vol. 17, N
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Rhabditida Chitwood, 1933
Rhabditidae (Oerley, 1880) Travassos, 1920
Cruznema
(Artigas, 1927) Dougherty, 1953
Cruznema
sp.
Descripción: Nemátodos blancos y muy pequeños.
Cutícula con estrías longitudinales y anillos transversales.
Boca rodeada de seis labios bien separados, con sensilas
labiales papiliformes. Estoma cuticularizado, largo y con
tres dientes bien desarrollados (Fig. 3a). Esófago con un
bulbo medio fuerte y musculoso y un bulbo basal valvado
(Fig. 3a). Anillo nervioso se ubica entre el bulbo medio y
el bulbo basal. Poro excretor abre a nivel medio del bulbo
basal. Hembra con un ovario prodélfco que se dobla
terminando anterior a la vulva. Vulva se ubica posterior
a la mitad de la longitud del cuerpo (Fig. 3b), sin saco
vulvar. Apéndice caudal corto y cónico (Fig. 3b).
Figura 3.
Cruznema
sp. (a-c) a. Extremo anterior de la hembra, esófago, b. Extremo
posterior de la hembra, vulva posterior, c. Huevos embrionados. Barras= 100 µm.
Hembra: n= 22. Longitud total del cuerpo: 810 µm
(750-920); longitud del estoma: 14,92 µm (13,50-
15,70); ancho del estoma: 5,32 (5,02-5,95); diámetro
a nivel de las papilas cefálicas: 9,02 µm (8,75-9,30);
diámetro a nivel del anillo nervioso: 23,40 µm (21,75-
24,10); diámetro máximo del cuerpo: 34,04 µm (32,80-
36,25); diámetro del cuerpo a nivel de la vulva: 35,10
µm (33,45-37); diámetro del cuerpo a nivel del extremo
posterior: 24,46 µm (23,50-26,70); longitud del esófago:
125,54 µm (122,80-132,65); distancia extremo anterior
al anillo nervioso: 95,85 µm (92-101); distancia extremo
anterior al poro excretor: 131,92 µm (128,75-142); V: 64
% (62-65); longitud y diámetro de los huevos: 46,80 µm
(45,70-47,20) x 23,60 µm (22,75-24,50); longitud del
apéndice caudal: 48,75 µm (45,80-50,45).
Hospedador
:
Tityus carrilloi
Ojanguren-Aflastro,
Kochalka, Guerrero-Orellana, Garcete-Barrett, De
Roodt, Borges & Ceccarelli, 2021
Ubicación en el hospedador
: Parasitando el intestino del
hospedador.
Localidad:
La Plata, Barrio Gambier, provincia de Buenos
Aires, Argentina (34º56
ʹ
35
ʺ
S 57º58
ʹ
41
ʺ
O).
Citamos por primera vez para Argentina a los nematodos
en escorpiones de la especie
Tityus carrilloi
Ojanguren-
Aflastro, Kochalka, Guerrero-Orellana, Garcete-Barrett,
De Roodt, Borges & Ceccarelli, 2021.
DISCUSIÓN
Los nematodos hallados, tanto en escorpiones como en
arañas, pertenecen al orden Rhabditida, solamente se
obtuvieron hembras y larvas, pero a pesar de la ausencia
de los machos se pudo determinar los géneros, ya que
presentan características propias del género
Cruznema
y
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Camino
et al.
del género
Rhabditis
. Para el caso del género
Cruznema
se
halló parasitando el intestino del escorpión
T. carrilloi
, es
un género que hallamos en insectos en la cavidad general
(Reboredo & Camino, 1998) y también suele ser de vida
libre (Poinar, 1975). El género
Rhabditis
puede parasitar
la cavidad general de un insecto o presentarse de vida
libre, bacteriófagos (Poinar, 1975).
La mayoría de las rabditidos tienen un complemento
haploide de cinco a seis cromosomas (Blaxter, 2000;
Coghlan, 2005). En cultivos de rhabditidos del género
Poikilolaimus,
Hong
et al.
(2005) describen la presencia de
cinco bivalentes pequeños y para
P. pacifcus
Hong
at al.
,
2005, propone una determinación del sexo X0/XX, Ahn
& Winter (2005) al estudiar las gónadas del nemátodo
Oscheius tipulae
Lam & Webster, 1971, describen la
presencia de seis cromosomas. En ese trabajo, Ahn &
Winter (2005), plantean que el grupo sería altamente
conservativo en el número de cromosomas. En ninguno
de los trabajos anteriores se describen mitosis y sólo se
limitan a células en goniales. Los resultados obtenidos
en el presente trabajo reúnen células en mitosis y células
en meiosis, el número haploide descripto en este trabajo
es la mitad de lo descripto en los trabajos anteriores. El
número es coincidente con lo descripto para
Diploscapter
Cobb, 1913, un nematode de vida libre (Herman, 1988).
La ausencia de machos en los cultivos realizados sobre
T.
molitor
, así como la ausencia de machos en los exudados
obtenidos a campo podrían indicar que es la misma
“hembra” la que produce y fecunda ambos gametos en
su interior, dado que las metafases II encontradas darían
gametos con dos autosomas y las metafases II de tres
cromosomas originarían los gametos de dos autosomas
y un cromosoma sexual. Futuros estudios se deberían
orientar a analizar si el cariotipo 2n= 4A+X pertenece a
la parte femenina o masculina del individuo ya que de
pertenecer a la parte femenina la correcta nomenclatura
debería ser 2n=4A+Z.
Este es el primer trabajo en el que se describen nematodos
parásitos de arácnidos y en el que se describe la división
mitótica y se aporta información acerca de la morfología de
los cromosomas de los nematodos parásitos de
D. crocata
.
AGRADECIMIENTOS
Se agradece a las autoridades de La Plata Polo Club,
Argetnina por el permiso para ingresar a su predio a para
capturar las arañas
Dysdera
, a Lola Godoy Manterola y
Juan Martín Mascheroni por la ayuda en la captura de
arañas.
Author contributions
:
CRediT (Contributor Roles
Taxonomy)
NBC
= Nora B. Camino
SRG
= Sergio Rodríguez-Gil
GRR
= Guillermo R. Reboredo
SEG
= Sandra E. González
Conceptualization
: NBC, SRG, GRR, SEG
Data curation
: NBC, SRG, GRR, SEG
Formal Analysis
: NBC, SRG, GRR, SEG
Funding acquisition
: NBC, SRG, GRR, SEG
Investigation
: NBC, SRG, GRR, SEG
Methodology
: NBC, SRG, GRR, SEG
Project administration
: NBC, SRG, GRR, SEG
Resources
: NBC, SRG, GRR, SEG
Software
: NBC, SRG, GRR, SEG
Supervision
: NBC, SRG, GRR, SEG
Validation
: NBC, SRG, GRR, SEG
Visualization
: NBC, SRG, GRR, SEG
Writing – original draft
: NBC, SRG, GRR, SEG
Writing – review & editing
: NBC, SRG, GRR, SEG
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Morphology and cytogenetics of nematodes
Neotropical Helminthology (Lima). Vol. 17, N
º
2, jul - dic 2023
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Received August 23, 2023.
Accepted October 6, 2023.